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CHO細(xì)胞外泌體的分離和表征

CHO細(xì)胞外泌體的分離和表征CHO細(xì)胞是一種廣泛用于生物制藥蛋白質(zhì)生產(chǎn)的宿主。CHO細(xì)胞中分離外泌體主要采用聚合物的沉淀(PBP)技術(shù)從分批培養(yǎng)中分離和富集細(xì)胞外泌體囊泡。分離后的外泌體可以通過多種方法來檢測和表征分離的囊泡，這些分析包括動態(tài)光散射(DLS)和Zeta電位測量、電子顯微鏡(EM)和外泌體標(biāo)記物分析、RNA和脂質(zhì)分析等。一、細(xì)胞培養(yǎng)1.培養(yǎng)基與細(xì)胞細(xì)胞可使用CHO系中的CHO-S細(xì)胞。培養(yǎng)基使用CD-CHO培養(yǎng)基（ThermoFisher）。在培養(yǎng)基中添加8mM...

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如何選擇移液槍移液吸頭

如何選擇移液槍移液吸頭如何選擇實(shí)驗(yàn)室移液吸頭?任何移液器，其性能和精確度都會因使用質(zhì)量不佳或不合適的吸頭而受到嚴(yán)重影響。移液器和移液器吸頭作為一個(gè)系統(tǒng)，只有互相匹配才能保證準(zhǔn)確地轉(zhuǎn)移和輸送液體。在掌握正確的移液技術(shù)后，匹配推薦的吸頭，就能保證移液的精度。一般分為：①袋裝吸頭、②盒裝吸頭、③低吸附吸頭、④濾芯吸頭、⑤自動化吸頭等。透明吸頭VS.有色吸頭當(dāng)前，市場上吸頭基本上都是用聚丙烯塑料（化學(xué)惰性高，使用溫度范圍廣的無色透明塑料）做的。不過，同樣是聚丙烯，品質(zhì)差別也會很大：高...

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如何選購合適的PCR耗材

如何選購合適的PCR耗材PCR耗材包括PCR管(EP管）、8連排管、96孔PCR板、深孔板等這些材質(zhì)一般為聚丙烯PP材質(zhì)，具有高品質(zhì)、高純度、高透明的特點(diǎn)，一般都在潔凈空間生產(chǎn)加工。PCR耗材為什么一般都是PP材質(zhì)的呢，為什么需要環(huán)境潔凈？因?yàn)镻CR/qPCR耗材通常會與試劑或樣品直接接觸，而聚丙烯（PP）材質(zhì)是生物學(xué)惰性材料，表面不易于粘附生物分子，且有著良好的化學(xué)耐性，及溫度耐受性（可以121℃高壓滅菌，也可以承受熱循環(huán)過程中的溫度變化）。這里強(qiáng)調(diào)一下耗材質(zhì)量（是否干凈）...

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實(shí)時(shí)定量PCR技術(shù)中常見問題匯總

實(shí)時(shí)定量PCR技術(shù)中常見問題匯總實(shí)時(shí)定量PCR技術(shù)（real-timePCR）也叫qPCR（QuantitavePCR），是指在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團(tuán)，利用熒光信號累積實(shí)時(shí)監(jiān)測整個(gè)PCR進(jìn)程，最后通過特定數(shù)學(xué)原理對未知模板進(jìn)行定量分析的方法。它是一項(xiàng)臨床上非常成熟的技術(shù)，目前在分子生物學(xué)領(lǐng)域，qPCR核酸定量的主要方法。目前仍在全球肆虐的病毒鑒定的“金標(biāo)準(zhǔn)”——核酸檢測就是通過qPCR原理進(jìn)行的。那么拿到一個(gè)樣本，需要經(jīng)過以下多項(xiàng)操作流程才能定量檢測到它的核酸含量。其中...

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使用生物反應(yīng)器研究乳腺癌亞型細(xì)胞外囊泡產(chǎn)生技術(shù)

使用生物反應(yīng)器研究乳腺癌亞型細(xì)胞外囊泡產(chǎn)生技術(shù)使用傳統(tǒng)體外方法生產(chǎn)的EV的深入表征和驗(yàn)證由于需要大面積的細(xì)胞單層和大量的培養(yǎng)基，培養(yǎng)可能具有挑戰(zhàn)性。該實(shí)驗(yàn)方法使用貼壁細(xì)胞生物反應(yīng)器系統(tǒng)以節(jié)省空間、資源和時(shí)間的方式同時(shí)培養(yǎng)多種不同亞型的乳腺癌細(xì)胞系，從而能夠持續(xù)生產(chǎn)大量用于下游實(shí)驗(yàn)的EV。一、生物反應(yīng)器接種、適應(yīng)和維護(hù)培養(yǎng)基A：含有10%胎牛血清（FBS，Merck）和1%青霉素/鏈霉素（PS，Gibco）的DMEM（Gibco）。培養(yǎng)基B：AdvancedDMEM/F-12(...

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